人CD3+ T细胞分离试剂盒（负选）
91-01-0005
产品简介
本产品能够从新鲜或冻存的外周血单个核细胞中简便快捷的负选出高纯度的CD3+ T细胞。能够处理的总细胞量为1×109，可为基础和临床研究使用CD3+ T细胞提供一个有力的武器。
预期用途
适用于从人外周血、浓缩白细胞来源的单个核细胞中负选出CD3+ T细胞。
产品信息
中文名称 | 人CD3+ T细胞分离试剂盒（负选） |
英文名称 | Human Pan T cell isolation kit |
货号 | 91-01-0005 |
细胞处理量 | 用于处理1×109个细胞 |
分选方法 | 负选 |
试剂盒组成
成分名称 | 物理性状 | 规格 | 数量 |
人Fc受体阻断剂 | 无色透明液体 | 1mL/支 | 2支 |
人CD3细胞生物素化抗体 | 无色透明液体 | 2mL/支 | 1支 |
链霉亲和素磁珠 | 棕色混悬液 | 1mL/支 | 1支 |
细胞分选缓冲液 | 无色透明液体 | 500mL/瓶 | 1瓶 |
保存方式
人Fc受体阻断剂、生物素化抗体，链霉亲和素磁珠及细胞分选缓冲液均置于2-8°C保存，有效期为12个月；生产日期，有效期至：见标签。
操作步骤
1、 单个核细胞的提取
分离外周血单个核细胞(推荐美高梅mgm集团4688快速单个核细胞分离管，货号91-01-0002),详细使用方法参见单个核细胞分离管说明书。
2、 人CD3+ T细胞分离
注意：整个细胞分离过程可大致分为PBMC洗涤-Fc受体阻断剂孵育-抗体孵育-洗涤-磁珠孵育-磁吸等步骤，其中，PBMC洗涤，Fc受体阻断剂孵育，抗体孵育在离心管操作即可，磁珠的孵育与磁吸等则转移至流式管中操作。
1. PBMC洗涤：往PBMC中加入预冷的细胞分选缓冲液（1×107cells/1-5mL），300g离心10min；
2. 调整细胞密度与预冷：弃上清，加入一定量的预冷的细胞分选缓冲液，将PBMC浓度调整为1×108cells/mL，冰浴或4°C预冷5min；
注意：若所分离的细胞数量过少，例如只有1×107cells，则可将细胞密度调整为5×107cells/mL。
3. Fc受体阻断剂孵育：将Fc受体阻断剂以200uL/1×108cells的比例加入到PBMC中，迅速用移液枪轻柔吹打，充分混合后置于4°C孵育5min；
4. 生物素化抗体孵育：Fc受体阻断剂孵育完毕后，将生物素化抗体以200uL抗体/1×108初始PBMC的比例将加入细胞悬液中，迅速用移液枪轻柔吹打，充分混合后置于4°C孵育15min；
5. 未结合抗体的洗涤：孵育完毕后，加入细胞分选缓冲液（1×107cells/1-5mL），300g离心10min后，弃上清，加入一定量的细胞分选缓冲液，使细胞悬液体积回复到初始时的水平；
注意：弃上清时，往往在管口处残留些许缓冲液，尽可能将这些残留液用移液枪等吸取干净，必要时可再次用缓冲液洗涤，避免残留液中的部分抗体成分对后续的磁珠与细胞的结合产生干扰。
6. 磁珠孵育：将细胞悬液转移至流式管，以100uL磁珠/1×108初始PBMC的比例将链霉亲和素磁珠加入到PBMC中，迅速用移液枪轻柔吹打均匀，4°C孵育10min；
7. 磁吸：孵育完毕后，磁吸3min，收集未磁吸的细胞悬液；
注意：若磁吸时细胞量较少，可加入1mL的细胞分选缓冲液重悬细胞后再磁吸。
8. 再次磁吸：加入与第7步同体积的细胞分选缓冲液，轻柔吹散磁珠后再次磁吸3min，收集未磁吸的液体并与第7步中所收集的液体合并；
注意：
1）将合并的细胞悬液重复磁吸一次，可进一步去除非目的细胞；
2）当有的样本细胞分选纯度不高时，可在此步重复加入少量磁珠，并重复磁吸步骤，可进一步提高纯度，但该操作会损失部分目的细胞。
9. 所得细胞即为CD3+ T细胞。
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