人CD8+ T细胞分离试剂盒（负选）
91-01-0008
产品简介
CD8分子系一种异二聚体糖蛋白，由α链和β链组成，跟2号染色体基因密切相关。其为MHCI类分子共受体；α链编码产生小分子分泌性多肽，可能参与免疫调节机制。正常表达见于和CD4一起表达于皮质胸腺细胞；部分末期胸腺细胞和成熟T淋巴细胞（此阶段不与CD4共表达）；巨噬细胞（但不表达于破骨细胞）；NK细胞（NK细胞的CD8表达强度弱于CD8＋的T细胞）。异常表达见于大部分大颗粒淋巴细胞白血病（LGL），亦可表达于小部分T细胞白血病/淋巴瘤。本产品能够从新鲜或冻存的外周血单个核细胞中简便快捷的分选出较高纯度的CD8+ T细胞。能够处理的总细胞量为1×109，为基础和临床研究使用CD8+ T细胞提供一个有力的工具。
预期用途
适用于从人外周血、浓缩白细胞来源的单个核细胞等单细胞悬液中分选出CD8+ T细胞。
产品信息
中文名称 | 人CD8+ T细胞分离试剂盒（正选） |
英文名称 | Human CD8+ T cell isolation kit （positive selection） |
货号 | 91-01-0008 |
细胞处理量 | 用于处理1×109个细胞 |
分选方法 | 正选 |
试剂盒组成
成分名称 | 物理性状 | 规格 | 数量 |
CD8生物素化抗体 | 无色透明液体 | 200μL/支 | 1支 |
链霉亲和素磁珠 | 棕色混悬液 | 200μL/支 | 1支 |
细胞分选缓冲液 | 无色透明液体 | 500mL/瓶 | 1瓶 |
保存方式
生物素化抗体、链霉亲和素磁珠及细胞分选缓冲液均置于2-8°C保存，有效期为12个月；生产日期，有效期至：见标签。
操作步骤
1、 单个核细胞的提取
分离外周血单个核细胞(推荐美高梅mgm集团4688快速单个核细胞分离管，货号91-01-0002),详细使用方法参见单个核细胞分离管说明书。
2、 CD8+ T细胞分离详细步骤（正选）
注意：整个细胞分离过程可大致分为PBMC洗涤-Fc受体阻断剂孵育-抗体孵育-洗涤-磁珠孵育-磁吸等步骤，其中，PBMC洗涤，Fc受体阻断剂孵育，抗体孵育在离心管操作即可，磁珠的孵育与磁吸等则转移至流式管中操作。
1. 往PBMC中加入适量（推荐每1×108cells使用50mL）预冷的细胞分选缓冲液用以洗涤PBMC，300g离心8min；
2. 弃上清，加入适量预冷的细胞分选缓冲液，将PBMC浓度调整为1×108cells/mL，冰浴或4°C预冷5min；
3. 以20μL生物素化抗体/mL PBMC的比例将生物素化抗体加入PBMC中，用移液枪轻柔吹打20次或涡旋震荡5S，充分混合后置于4°C孵育15min；
4. 孵育完毕后，加入细胞分选缓冲液，300g离心8min；
5. 弃上清，使用细胞分选缓冲液将PBMC浓度调整为108/mL；
6. 以20μL磁珠/mL PBMC的比例将链霉亲和素磁珠加入到PBMC中，用移液枪轻柔吹打20次混匀，室温静置孵育10min；
7. 孵育完毕后，加入2.5mL细胞分离缓冲液混匀后使用磁极磁吸3min去掉未被磁吸液体；
8. 重复步骤7一到两次；
9. 将收集细胞加入适量（推荐每1×108cells使用50mL）预冷的细胞分选缓冲液300g离心8min去上清，所得沉淀即为目的细胞即可用于下游分析及应用。
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