Naive CD8+ T细胞分选试剂盒，人(92-01-0095)
92-01-0095
产品信息
[组分]
1mL Naive CD8+ T细胞生物素-抗体混合物，人:生物素偶联的CD45RO、CD56、CD57和CD244 的单抗的混合物。
2mL 抗生物素磁珠:与抗生物素偶联的磁珠(同型:小鼠IgG1型)。
2mL CD8 磁珠，人:与CD8单抗偶联的磁珠(同型:小鼠IgG2a)。
[规格]
可分选109总细胞数，多达100次分选。
[保存形式]
所有组分均保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。
使用方法
[试剂和设备]
缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和 2mM EDTA 的溶液。
选择合适的分选柱和分选器，在LD 柱上去除非Naive T细胞，随后在xM柱上进行Naïve CD8+ T细胞的阳性分选。也可以使用自动分选器进行操作。
(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
(可选)用于流式细胞术分析的荧光标记抗体。
(可选)碘化丙啶溶液或7-AAD用于流式细胞术排除死亡细胞。
[1.样本制备]
使用标准方法从抗凝外周血或白膜层中通过密度梯度离心分离单个核细胞(PBMC)。
[2.磁性标记非 naïve T细胞]
1.细胞计数。
2.300xg离心10min，去除上清。
3.每 107细胞，用40μL缓冲液重悬。
4.每 107细胞，用10μL Naive CD8+T细胞生物素抗体混合物混匀。
5.2-8℃冰箱避光孵育10min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
6.每107细胞，加入30μL 缓冲液。
7.每107细胞，加入20μL抗生物素磁珠。
8.混合均匀，在冰箱(2-8℃)中孵育15分钟。
9.每 107细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300Xg离心10分钟。完全吸去上清液。
10.加 500μL缓冲液重悬细胞。
[3.磁性分选:去除非naiveT细胞]
1.将 LD 分选柱放置在分选器的磁场中。
2.在分选柱中加入2mL缓冲液，充分湿润分选柱。
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加2mL缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗2次。收集总流出物。
5.进一步分选naïve CD8+T细胞。
[4.磁性标记 CD8+T细胞]
1.细胞悬液离心，300Xg，10min，去除上清。
2.用 80 μL 缓冲液重悬。
3.用20 μL CD8 磁珠混匀。
4.2-8℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
5.(可选)加入染色抗体，2-8℃冰箱避光孵育5分钟。
6.加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300Xg离心10分钟。完全吸去上清液。
7.加 500μL 缓冲液重悬细胞。
[5.磁性分选:naive CD8+T细胞]
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将xM分选柱中加入500μL缓冲液，充分湿润分选柱:
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加500μL缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加1mL缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是目的细胞。
7.(可选)为了提高naïve CD8+T细胞的纯度，洗脱部分可以在新的分选柱上进行浓缩。使用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁选过程。
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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