CD19磁珠试剂盒，人(92-01-0335)
92-01-0335
分选原理
首先，用 REAleaseCD19-生物素(REAleas生物素复合物)标记外周血单核细胞(PBMC)中的靶细胞。随后，REAlease抗生物素磁珠(CD19，人)与RELease 生物素复合物结合。
然后，将细胞悬液加到分选柱上，该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的细胞保留在柱内。未标记的非靶细胞流过。从磁场中取出分选柱后，使用RELease磁珠释放试剂洗脱目标细胞，同时从细胞中去除磁珠。后，在与REAlease释放试剂一起孵育的过程中，REAlease生物素复合物解体并从细胞表面解离，使细胞不含所有标记物。
产品信息
[组分]
1 mL REAleaseCD19-生物素，人
5 mL REAlease 抗生物素磁珠(CD19，人)
4 mL REAlease 磁珠释放试剂(50X)
4 mL REAlease 释放试剂
4 mL REAlease终止试剂。
[规格]
可分选 109总细胞数，多达100次分选。
[保存形式]
RELease 终止试剂保存在在含有0.05%叠氮化钠的缓冲液中，其他组分均保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。
使用方法
[试剂和设备]
缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和2mM EDTA 的溶液。
选择合适的分选柱和分选器。
(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
(可选)用于流式细胞术分析的荧光标记抗体。
(可选)碘化丙啶溶液或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。
[1.样本制备]
当使用抗凝外周血或白膜层时，应通过密度梯度离心分离 PBMC。
[2.磁性标记]
1.细胞计数。
2.300g离心10min，去除上清。
3.每107细胞，用40μL缓冲液重悬。
4.每 107细胞，用10μL RELease CD19-生物素。
5.混匀后避光孵育5min。
6.每 107细胞加入50μL RELease抗生物素磁珠(CD19，人)。
7.混合均匀，孵育5分钟。
8.(可选)加入染色抗体，在冰箱(2-8℃)避光孵育5分钟。
9.加 500μL缓冲液重悬细胞，总细胞数量不超过5X107个。
[3.磁性分选并去除磁性标记]
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.在分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM:500 μL；xL: 3 mL）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。（xM:3x500 μL；xL:3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。将适量的RELease磁珠释放试剂(由RELease 磁珠释放试剂(50X)配制)加到分选柱上。通过将柱塞牢牢地推入柱中，立即将冲洗出靶细胞。（xM:1mL；xL: 5 mL）
6.充分混合并孵育10分钟。
7.细胞现在不含磁珠，可用于分析和下游应用。
[4.去除 RELease 复合物并使用RELease磁珠进行第二次磁性标记]
【4.1 去除 RELease复合物】
1.去除 RELease 复合物，300g离心10min，去除上清。
2.用适当的缓冲液重悬。（xM: 1mL；xL:5mL）
3.添加适当的 RELease释放试剂。（xM:20μL；xL:100μL）
4.充分混匀并孵育5分钟。
5.细胞现在不含RELease复合物以及磁珠，可用于分析和下游应用。
6.(可选)对于使用RELease磁珠进行第二次磁性标记的，请继续以下操作。
【4.2 使用 RELease磁珠进行二次磁性标记】
1.将细胞悬液300Xg离心10分钟，去上清。
2.每 107细胞加入40 μL RELease终止试剂重悬。
3.混匀。
4.重复[2.磁性标记]中步骤4-9进行磁性标记。
【4.3(可选)使用分选磁珠进行第二次磁性标记】
1.300Xg离心细胞悬液10分钟。完全吸出上清液。
2.添加说明书推荐的分选磁珠用量，以磁性方式标记细胞作为第二个标记过程。
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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