CD45分选磁珠，小鼠(92-01-0044)
92-01-0044
分选原理
首先，用 CD45+磁珠对细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬液加到分选柱上，该柱放置在含分选器的磁场中。磁性标记的CD45+细胞被保留在柱内。未标记的细胞贯穿其中，因此，这一细胞部分的细胞被去除。将分选柱从磁场中移除之后，洗脱磁性标记的CD45+细胞。
产品信息
[组分]
2mL CD45 磁珠，小鼠:与单克隆抗小鼠CD45抗体(Ly-5;同种型:大鼠lgG2b;克隆号:30F11.1)偶联的磁珠。
[规格]
2mL，可分选2x109总细胞数，总计200 次分选。
[保存形式]
保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。
使用方法
[试剂和设备]
缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和 2mM EDTA的溶液。保持缓冲液冷却状态(2-8℃)。
分选柱和分离器:CD45+细胞可通过xM、xL 柱(阳性选择)进行富集。也可以使用自动分选器进行阳性选择。
(可选)用于流式细胞术分析的荧光偶联CD45 抗体。
(可选)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。
(可选)用于去除细胞团的预分离过滤器。
[1.样本制备]
使用标准方法从淋巴器官、非淋巴组织或外周血中制备单细胞悬浮液。
[2.磁性标记]
1.细胞计数。
2.淋巴细胞离心，300g，10min，去除上清。
3.每107细胞，用90μL缓冲液重悬。
4.每 107细胞，用10μL CD45 磁珠混匀。
5.4℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
6.(可选)加入染色抗体，在2-8℃孵育5分钟。
7.每 107细胞，加入1-2mL缓冲液洗涤，300g离心10min，弃上清。
8.用 500μL缓冲液重悬细胞。
[3.磁性分选]
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM: 500 μL；xL:3 mL）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。（xM:3X500μL；xL:3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是目的细胞。（xM:1mL；xL: 5 mL）
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冻存。保质期见瓶子标签。
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