CD4+记忆T细胞分选试剂盒,人(92-01-0268)

92-01-0268

产品信息

[组分]

1mL        记忆CD4+T细胞生物素-抗体混合物,人:偶联CD8,CD14,CD16,CD19,CD36,CD45RA,CD56,CD123,T细胞受体v/8和糖蛋白A抗体的生物素混合物。

2mL        抗生物素磁珠:与抗生物素偶联的磁珠。

[规格]

可分选109总细胞数,总计100次分选。

[保存形式]

所有组分均保存在含有稳定剂和0.05%叠氮钠的溶液中。

储存条件

在2-8℃条件下避光保存,请勿冷冻。有效期见试剂外标签。

使用方法

[试剂和设备]

缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和2mMEDTA的溶液。

选择合适的分选柱和分选器,也可以使用自动分选器进行操作。

(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。

(可选)用于流式细胞术分析的荧光标记抗体。

(可选)碘化丙啶溶液或7-AAD用于流式细胞术排除死亡细胞。

 

操作步骤

[1.样本制备]

使用标准方法从淋巴器官、非淋巴组织或外周血中制备单细胞悬浮液。

▲注:死亡细胞可能非特异性地结合到磁珠上。要去除死细胞,我们建议使用密度梯度离心法或死细胞去除试剂盒。

 

[2.磁性标记]

▲过程操作速度要快,试剂需提前预冷。可以减少非特异性细胞标记。

▲磁性标记的体积多可达107个细胞。少于107个细胞时,请使用标示的相同体积。当处理更多的细胞时,相应地放大所有试剂体积(例如,对于2X107个总细胞,使用标示试剂体积的两倍)。

▲为了获得佳性能,在磁分选之前获得单细胞悬液是很重要的。通过预分离过滤器去除可能堵塞分选柱的细胞团块。

1.细胞计数。

2.淋巴细胞离心,300g,10min,去除上清。

3.每107细胞,用40μL缓冲液重悬。

4.每107细胞,用10μL生物素抗体混合物混匀。

5.4℃冰箱避光孵育10min(如果是在冰上孵育,需要增加孵育时间;如果是常温孵育,会增加非特异结合)。

6.每107细胞,加入30μL缓冲液。

7.每107细胞,加入20μL抗生物素磁珠。

8.混合均匀,在冰箱(2-8℃)中孵育15分钟。

9.每107细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞,300Xg离心10分钟。完全吸去上清液。

10.加500μL缓冲液重悬细胞。

 

[3.磁性分选]

根据总细胞数和标记细胞数选择合适的分选柱和分选器。

1.将分选柱放置在分选器的磁场中。

2.将LS分选柱中加入3mL缓冲液,充分湿润分选柱:

3.将细胞悬液加到分选柱中。

4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上,没有结合的细胞会顺着液体流下来。加3mL缓冲液,待液体全部流尽,再加入适量缓冲液,一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的CD4+记忆T细胞。

5.(可选)将分选柱从分选器中取出,并将其放在合适的收集管上。将5mL缓冲液移液到分选柱上。通过将柱塞牢牢地推入柱中,立即将带有磁性标签的细胞冲洗出来。这部分代表磁性标记的非CD4+T细胞和naïve CD4+T细胞。

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