新品 | 抗PE分选磁珠

日期:2024-04-08 阅读:

产品描述


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分选原理

首先,用 PE 偶联的一抗或其配体对细胞进行染色。随后,用抗PE磁珠对细胞进行磁性标记。然后将细胞悬液加载到分选柱上,该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的细胞保留在柱中,而未标记的细胞则通过。将分选柱从磁场中移开后,磁性标记的细胞可以作为正选细胞被洗脱下来。


产品信息


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使用方法


试剂和仪器要求

●缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和2mM EDTA的溶液。保持缓冲液冷却状态(2-8℃)。

●分选柱和分选器:抗PE磁珠标记的细胞可通过xM、xL柱(阳性选择)进行富集。也可以使用自动分选器进行阳性选择或者去除。

●PE 偶联的一抗或配体。

●(可选)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。

●(可选)用于去除细胞团的预分离过滤器。

●(可选)死细胞去除试剂盒,用于去除死细胞。


操作步骤

一、样本准备

当使用抗凝外周血或白膜层时,应通过密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC)。

当处理组织或溶解的血液时,使用标准方法制备单细胞悬浮液。


二、磁珠标记

1.细胞计数。

2.300Xg离心10分钟,去除上清。

3.根据说明书建议重悬细胞沉淀并用PE偶联一抗进行染色。

4.充分混合并在冰箱(2-8℃)中避光孵育10分钟或按照说明书的建议进行。

5.每 107细胞添加1-2mL缓冲液,洗涤细胞以去除未结合的一抗,并以300Xg离心 10分钟。

6.(可选)重复清洗步骤。

7.完全吸出上清液,每107个总细胞加80μL缓冲液重悬细胞沉淀。

8.每107总细胞添加20μL抗 PE 磁珠。

9.充分混合并在冰箱(2-8℃)中孵育15 分钟。

10.每107细胞添加1-2mL缓冲液洗涤细胞,并以300Xg离心10分钟。

11.完全吸出上清液。

12.加 500μL缓冲液中重悬细胞,多重悬108细胞。

13.进行磁分选。


三、细胞分选

xM或xL分选柱进行细胞分选

1.将分选柱放置在分选器的磁场中。

2.将分选柱中加入适量缓冲液,充分湿润分选柱(xM:500 μL;xL:3 mL)

3.将细胞悬液加到分选柱中。

4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上,没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液,待液体全部流尽,再加入适量缓冲液,一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。(xM:3X500 μL;xL:3x3mL)

5.将分选柱从分选器中取出,并将其放在合适的收集管上。

6.加适量的缓冲液到分选柱中,迅速用塞子推下,得到就是磁性标记的细胞。(xM:1mL;xL: 5 mL)


储存条件


在2-8℃条件下避光保存,请勿冻存。有效期见瓶子外标签。

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