新品 | 小鼠CD117分选磁珠
日期：2024-06-20 阅读：
产品描述
CD117磁珠是为分离小鼠祖细胞而开发的。CD117又称c-kit、stell因子受体和干细胞因子受体，编码一种145kD的细胞表面糖蛋白，属于III类受体酪氨酸激酶家族。它在大多数造血祖细胞上都有表达，包括多能造血干细胞以及成熟的骨髓细胞、红细胞和淋巴细胞前体细胞。除了造血细胞分化潜能外，据报道，小鼠骨髓中的CD117+干细胞还能在体内分化为平滑肌细胞、肌细胞和内皮细胞。
分选原理
首先，用CD117磁珠对CD117+细胞进行磁性标记。然后，将细胞悬浮液装入置于分选器磁场的分选柱中。磁性标记的CD117+细胞被保留在柱中，未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后，磁性保留的CD117+细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液：配制含有pH7.2PBS、0.5%牛血清白蛋白（BSA）和2mMEDTA的溶液。将缓冲液置于2-8°C。使用前对缓冲液进行脱气处理，因为空气气泡可能会堵塞分选柱。
●分选柱和分选器：CD117阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。
●(可选)荧光偶联的抗体用于流式分析。
●(可选)小鼠谱系细胞去除试剂盒。
●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。
●(可选)死细胞清除试剂盒用于死细胞的清除。
●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。
操作步骤
一、样本准备
当处理淋巴器官、非淋巴组织或外周血时，使用手工方法或组织解离器制备单细胞悬液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300×g离心10分钟。去除上清。
3.每107个细胞总量使用80μL缓冲液重悬。
4.每107个细胞总量添加20μL CD117磁珠。
5.混匀，2−8°C孵育15分钟。
6.(可选)添加染色抗体，例如：10μL CD117-APC 2−8°C避光孵育5分钟。
7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300×g离心10分钟，去上清。
8.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。
9.进行细胞分选步骤。
三、细胞分选
1.将分选柱置于相对应的分选器中。
2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱（xM:500μL；xL:3mL）
3.将细胞悬液转移至分选柱中。收集包含未标记细胞的流出液。
4.加适量的缓冲液洗脱，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物，和第三步流出物混合。（xM:3×500μL；xL:3×3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是磁性标记的细胞。（xM:1mL；xL:5mL）
7.(可选)为了提高CD117+细胞的纯度，洗脱的部分可以在第二个xM或xL柱上富集。用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁分选过程。
储存条件
2-8°C避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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