新品 | 人TCRγ/δ+T细胞分选试剂盒
日期：2024-07-15 阅读：
产品描述
分选原理
根据说明书建议，首先用生物素化的单克隆抗体混合物对细胞进行标记。随后，用抗生物素磁珠对细胞进行间接磁性标记。然后将细胞悬液加载到分选柱上，该分选柱置于分选器的磁场中。磁性标记的非靶细胞保留在柱中，而未标记的靶细胞则通过，从而实现非靶细胞的去除与靶细胞的收集。
产品信息
使用方法
试剂和仪器要求
●缓冲液:含有pH7.2、0.5%BSA和2mM EDTA的溶液。不建议使用含有钙离子或镁离子的缓冲液。
●选择合适的分选柱和分选器，也可以使用自动分选器进行操作。
●(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。
●(可选)用于流式细胞术分析的荧光标记抗体。
●(可选)碘化丙啶溶液或7-AAD用于流式细胞术排除死亡细胞。
操作步骤
一、样本制备
使用标准方法从外周血或白膜层中分离单个核细胞(PBMC)。
二、磁性标记
1.细胞计数。
2.300xg离心10min，去除上清。
3.每107细胞，用80μL缓冲液重悬。
4.每 107细胞，用20μL生物素抗体混合物混匀。
5.(2-8)℃冰箱避光孵育10min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
6.每107细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300Xg离心10分钟。完全吸去上清液。
7.每107细胞，加入80μL缓冲液。
8.每107细胞，加入20μL抗生物素磁珠。
9.混合均匀，在冰箱(2-8°C)中孵育15分钟。
10.每10细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞，300Xg离心10分钟。完全吸去上清液。
11.加 500μL缓冲液重悬细胞。
三、磁性分选
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.在分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM:500μL；xL: 3mL）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是富集的未标记的目的细胞。（xM: 3X500μL；xL:3X3mL）
储存条件
在2-8℃条件下避光保存，请勿冻存。有效期见试剂外标签。
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