新品 | 小鼠CD45R(B220)分选磁珠

日期:2024-08-26 阅读:

产品描述


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小鼠CD45R(B220)磁珠用于从各种淋巴组织(如骨髓,淋巴结和脾脏)或非淋巴组织(如固有层,腹膜腔或肺)中阳选或去除小鼠B细胞。从早期pro-B细胞阶段开始,CD45R抗原在B谱系细胞的整个发育过程中表达,并在终分化为浆细胞时被下调表达。CD45R也在浆细胞样树突细胞上表达。


分选原理

首先,用CD45R(B220)磁珠对CD45R(B220)+细胞进行磁性标记。然后,将细胞悬浮液装入置于分选器磁场的分选柱中。磁性标记的CD45R(B220)+细胞被保留在柱中,未标记的细胞顺着分选柱流出。将柱从磁场中移出后,磁性保留的CD45R(B220)+细胞可作为正选细胞部分被洗脱出来。


产品信息


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使用方法


试剂和仪器要求

●缓冲液(脱气):配制含有pH7.2PBS、0.5%牛血清白蛋白(BSA)和2mMEDTA的溶液。将缓冲液置于2-8°C。

●分选柱和分选器:CD45R(B220)阳性细胞可以用xM、xL分选柱富集。强烈表达CD45R(B220)抗原的细胞也可以用xM、xL分选柱去除。

●(可选)荧光偶联的CD45R抗体用于流式分析。

●(可选)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死细胞。

●(可选)预分离过滤器去除细胞团块。


操作步骤

一、样本准备

用标准方法从淋巴器官、非淋巴组织或外周血中制备单细胞悬液。


二、磁珠标记

1.细胞计数。

2.300×g离心10分钟。去除上清。

3.每107个细胞总量使用90μL缓冲液重悬。

4.每107个细胞总量添加10μL CD45R(B220)磁珠。

5.混匀,2−8°C孵育15分钟。

6.(可选)添加染色抗体,例如:根据说明书推荐添加荧光偶联的CD45R抗体2−8°C避光孵育5分钟。

7.每107个细胞加入1-2mL缓冲液洗涤细胞,300×g离心10分钟,去上清。

8.用500μL缓冲液重悬多108个细胞。

9.进行细胞分选步骤。


三、细胞分选

xM或xL分选柱进行细胞分选

1.将分选柱置于相对应的分选器中。

2.用适当体积的缓冲液润洗分选柱(xM:500μL;xL:3mL)

3.将细胞悬液转移至分选柱中。

4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上,没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液,待液体全部流尽,再加入适量缓冲液,一共洗3次。收集总流出物,这是未标记的细胞。(xM:3×500μL;xL:3×3mL)

5.将分选柱从分选器中取出,并将其放在合适的收集管上。

6.加适量的缓冲液到分选柱中,迅速用塞子推下,得到就是磁性标记的细胞。(xM:1mL;xL:5mL)


储存条件


2-8℃避光保存,请勿冻存。有效期见试剂外标签。

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